产品货号:
GS0049
中文名称:
柱式DNA胶回收试剂盒
英文名称:
SgPrep Column DNA Gel Extraction Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于从TAE和TBE琼脂糖凝胶中回收100bp~10kb的DNA片段,回收效率在80%以上。本试剂盒采用特殊的吸附膜和结合液BB2,能够有选择性地吸附核酸分子,去除体系中的蛋白、小分子、盐分等其他杂质,通过洗脱液EB将DNA从吸附柱中释放,得到高质量的DNA回收产物。本试剂盒采用的膜结合液中不含有干扰酶活性的碘化钠,所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学实验。
- 适用范围广,回收效率高。
- 操作简单快速,整个回收过程仅需15分钟左右。
- 洗脱效率高,洗脱体积最小可低至15μL。
组分 | 50次 | 100次 |
结合液BB2 | 50mL | 100mL |
洗涤液WB | 12mL | 24mL |
洗脱液EB | 5mL | 10mL |
吸附柱及收集管 | 50套 | 100套 |
保存:室温干燥保存。
注意:结合液BB2中含有刺激性的化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口品。沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
- 准备工作。
□ 检查洗涤液WB中是否已经加入无水乙醇。
□ 检查结合液BB2是否出现沉淀。
□ 将水浴锅调至50℃。 - 从琼脂糖凝胶中割下含目标片段的胶块,称重。
- 加入胶块重量3~6倍的结合液BB2,50℃水浴5~10分钟溶胶。
- (选做)对于<500bp的片段,加入1/3结合液BB2体积的异丙醇。
- 将溶胶液移入吸附柱中,8000g离心30秒,倒掉收集管中液体。
- 加入500μL洗涤液WB,9000g离心30秒,倒掉收集管中液体。
- 重复步骤6一次。
- 空吸附柱于9000g离心1分钟。
- 将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中,在吸附膜中央加入15~40μL洗脱液EB,室温静置1分钟后,离心1分钟。保存管中DNA溶液。
准备工作:
- 自备材料:水浴锅、小型高速离心机(最大离心力>12000g)、1.5mL离心管、无水乙醇、异丙醇等。
- 按瓶身标签说明在洗涤液WB中加入相应虽的无水乙醇(乙醇终浓度为80%),混匀后在瓶身做好标记。密封于室温保存。
- 结合液BB2在低温下可能产生沉淀,使用前请检查,如有沉淀,请于37℃溶解沉淀,待冷却至室温后使用。捉前将水浴锅调至50℃备用。
操作步骤:
- 通过琼脂糖凝胶电泳尽可能将目的DNA片段与其它片段分开,用干净的手术刀片将含目的DNA片段的琼脂糖凝胶块切下,放入1.5mL离心管中,称重。
- 尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。
- 每管琼脂糖凝胶块不要超过400mg,否则导致溶胶不完全。
- 切胶过程尽可能快,减少DNA在紫外线中的暴露时间以降低对DNA的损伤。
- 尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。
- 根据胶块的重量和浓度,按每100mg琼脂糖(如胶块不足100mg则用水补充至100mg)加300~600μL的比例加入结合液BB2。
- 凝胶浓度≤1%,每100mg凝胶加入300μL结合液BB2;
- 1%<凝胶浓度≤1.5%,每100mg凝胶加入400μL结合液BB2;
- 1.5%<凝胶浓度≤2%,每100mg凝胶加入500μL结合液BB2;
- 凝胶浓度>2%,每100mg凝胶加入600μL结合液BB2。
- 凝胶浓度≤1%,每100mg凝胶加入300μL结合液BB2;
- 将离心管置于50℃水浴5~10min,间或混匀,直至胶块完全溶化。
- 胶块完全溶化即可,过长时间的处理可能导致DNA损伤。
- 当目的片段<500bp时,加入所使用的结合液BB2体积1/3的异丙醇,混匀。当目的片段≥500bp时,此步骤可以省略,直接进行步骤5。
- 将溶化好的溶液全部移入吸附柱,8000g离心30sec。倒掉收集管中的液体,将吸附柱放入同—个收集管中。
- 如果溶胶液总体积>750μL,则每次使用750μL,多次上柱。
- 向吸附柱中加入300μL结合液BB2,9000g离心30sec。倒掉收集管中的液体,将吸附柱放入同—个收集管中。
- 向吸附柱中加入500μL洗涤液WB,9000g离心30sec。倒掉收集管中的液体,将吸附柱放入同—个收集管中。
- Wash Solution首次使用前请检查是否已加入正确星的无水乙醇。
- 重复步骤7一次。
- 将空吸附柱和收集管放入离心机,9000g离心1min。
- 此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 在吸附膜中央加入15~40μL洗脱液EB,室温静置1~2min,9000g离心1min。将所得到的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
- 洗脱液EB为2.5mM Tris-HCl,pH8.5,可以用TE或水(pH>7.0)代替。
- 将洗脱液EB预热至60℃可以进一步提高得率。
- 请勿使用小于15μL的洗脱液进行洗脱。
- 洗脱液EB为2.5mM Tris-HCl,pH8.5,可以用TE或水(pH>7.0)代替。
- DNA回收效率较低或者未回收到目的片段
- 胶块溶解不完全:可适当延长水浴的时间,并增加颠倒混匀的频率辅助溶解。
- 胶块体积太大:溶胶困难。可先将胶块切碎,溶胶后分多次上柱离心,回收DNA片段。
- 漂洗液中未加入正确量的无水乙醇
- Agarose抑制DNA与吸附材料的结合:应尽量切除不含目的DNA片段的Agarose胶。
- 提高结合液BB2的相对浓度,增加DNA与吸附膜的作用时间(静置时间),在一定程度上可以提高回收率。
- 如果纯化的片段长度大于4kb或者目的片段含量较少,可以将洗脱液再次加入至吸附柱中进行洗脱,以提高回收效率。
- 洗脱液加入位置不正确:洗脱液应加在硅胶膜的中心部位,以完全覆盖硅胶膜的表面,达到最大的洗脱效率。
- 洗脱液不合适:洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响,如果使用水进行洗脱,请确保其pH值>7.0,pH值过低可能导致低洗脱效率。
- 洗脱时间过短:洗脱时放置1分钟可达到较好的洗脱效果。洗脱时将洗脱液预热至60℃后使用,有利于提高洗脱效率。
- 胶块溶解不完全:可适当延长水浴的时间,并增加颠倒混匀的频率辅助溶解。
- 回收DNA进行后续酶切反应效率低
- 洗脱产物中含有残留的乙醇:可将离心后的吸附柱开盖室温干燥2~5分钟,有助于残留的乙醇挥发完全。
- 盐份的残留:请确保使用洗涤液WB洗涤两次,每次500μL沿管壁加入,有助于彻底去除管壁上的盐份。
- 琼脂糖质量差:请选用高质量的琼脂糖。
- 洗脱产物中含有残留的乙醇:可将离心后的吸附柱开盖室温干燥2~5分钟,有助于残留的乙醇挥发完全。
- 琼脂糖凝胶胶块不溶
- 琼脂糖质量差:请选用高质量的琼脂糖。
- 含目的片段的胶块在空气中放置时间过长,使胶块失水、干燥。建议切胶后立即进行胶回收,或将胶块保存在4℃或-20℃备用。
- 配制琼脂糖凝胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。应重新配制缓冲液。
- 琼脂糖质量差:请选用高质量的琼脂糖。
- 洗脱液的选择
- 洗脱液可以根据后续实验的需要来确定:—般懦况下,若需要进行测序反应,请用双蒸水洗脱。如果需要长期保存DNA,请用TE洗脱。
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